Η αίθουσα της φρουράς εντοπίζεται αμέσως νοτίως της δυτικής κύριας πύλης του φρουρίου (Porta Maestra) και αποτελεί ένα από τα σημαντικότερα και καλύτερα διατηρημένα κτίσματα του Ενετικού στρατοπέδου. Κατασκευάζεται κατά την πρώτη οικοδομική φάση του φρουρίου, το 1579-1580, ενώ ο θόλος με τον οποίον στεγάζεται τοποθετείται γύρω στο 1582. Στην κορυφή του κυκλικού θόλου υπάρχει άνοιγμα το οποίο εξυπηρετεί τον εξαερισμό της αίθουσας. Το αρχικό δάπεδο της αίθουσας βρισκόταν σε χαμηλότερο επίπεδο σε σχέση με το σημερινό, όπως μαρτυρεί το τοιχισμένο τζάκι στη νότια πλευρά της, του οποίου μονάχα το πάνω μέρος διακρίνεται πλέον. Στη βόρεια πλευρά υπήρχαν δύο ανοίγματα, που τοιχίστηκαν σε κατοπινή περίοδο. Το κτίριο αυτό χρησιμοποιείται κατά την Ενετική περίοδο ως χώρος παραμονής των στρατιωτών που βρίσκονταν σε υπηρεσία, ενώ την περίοδο του Λεπροκομείου (1904-1957) ως απολυμαντήριο. Στο εσωτερικό τοποθετείται κλίβανος για την απολύμανση των αντικειμένων (χρήματα, επιστολές, κλπ.) που έβγαιναν έξω από τη νησίδα. Την περίοδο αυτή ανοίγεται και το μεγάλο παράθυρο στη δυτική πλευρά.